Biopolymer Xanthan: A New Adjuvant for DNA Vaccines

Abstract DNA vaccines have been evaluated as an option to prevent several diseases. In this study, the capacity of the xanthan biopolymer to improve the DNA vaccines immune response, administered intramuscularly, was evaluated. The experimental vaccines consisted of genes encoding fragments of the proteins LigA and LigB of Leptospira interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae serovar Copenhageni strain Fiocruz L1-130. The humoral immune response was evaluated by indirect ELISA. Cytokine expression levels were determined by RT-qPCR. Compared to the control group, the IgG antibody levels of animals immunized with pTARGET/ligAni and pTARGET/ligBrep plasmids associated with xanthan biopolymer were significantly higher than the control group. Additionally, there was a significant increase in IL-17 expression in animals vaccinated with pTARGET/ligBrep and xanthan.

Evaluation of Toxocara canis Glycosylated TES Produced in Pichia pastoris for Immunodiagnosis of Human Toxocariasis

Abstract Recombinant proteins are a suggested alternative for the diagnosis of toxocariasis. The current Escherichia coli recombinant protein overexpression system usually produces insoluble products. As an alternative, yeast such as Pichia pastoris have secretory mechanisms, which could diminish the cost and time for production. This study aimed to produce recombinant proteins in Pichia pastoris and verify their sensibility and specificity in an indirect ELISA assay. Two sequences (rTES-30 and rTES-120) of Toxocara canis excretory-secretory antigens were cloned in a pPICZαB vector and expressed in P. pastoris KM71H. Sera samples collected from human adults infected by Toxocara spp. were tested by indirect ELISA using rTES-30 and rTES-120 as antigens. Recombinant proteins were detected at 72 hours after induction, in the supernatant, as pure bands between 60~70 kDa with hyperglycosylation. Regarding diagnosis potential, recombinant antigens had high specificity (95.6%); however, sensitivity was 55.6% for rTES-30 and 68.9% for rTES-120. Further deglycosylation of the P. pastoris antigens did not seem to affect ELISA performance (p>0.05). The low sensitivity in the serodiagnosis diminished any advantage that P. pastoris expression could have. Therefore, we do not recommend P. pastoris recombinant TES production as an alternative for the diagnosis of toxocariasis.

Avaliação do índice de conicidade como preditor de risco cardiometabólico e suas associações em pacientes adultos submetidos a atendimento ambulatorial no Sul do Brasil / Evaluation of the conicity index as a predictor of cardiometabolic risk and its associations in adult patients submitted to outpatient care in Southern Brazil

Objetivo: Avaliar índice de conicidade de pacientes adultos atendidos em um Ambulatório de Nutrição, associá-lo com presença de patologias e compará-lo a indicadores antropométricos quanto à sua eficácia como preditor de risco cardiometabólico. Metodologia: Estudo observacional com dados secundários de prontuários. Dados socioeconômicos, antropométricos (peso, índice de massa corporal, circunferência da cintura, do pescoço e índice de conicidade), número de consultas e hábitos de vida, foram obtidos e comparados entre a primeira e última consulta. As análises foram realizadas no pacote estatístico Stata® 11.1, com nível de significância de 5%. Resultados: Amostra constituída por 164 adultos, sendo 114 (70%) mulheres. A maioria apresentava hipertensão (45%), sedentarismo (48%), peso acima do ideal (90%) e valores de CC(82%), CP (82%) e IC (88%) acima do recomendado. A maioria apresentou perda de peso (77%), sendo que 29% perdeu mais de 5% do peso inicial, além de melhora significativa nos hábitos alimentares, principalmente pelas mulheres. O índice de conicidade associou-se significativamente com os indicadores antropométricos analisados; foi mais sensível nas mulheres quanto à classificação de risco de complicações metabólicas e cardiovasculares, e apresentou valores significativamente maiores nos hipertensos e diabéticos. Conclusão: É importante o acompanhamento nutricional para melhoria dos hábitos de vida dos pacientes, assim como a utilização do IC, que associou-se com hipertensão e diabetes,sendo mais sensível nas mulheres em relação ao risco de complicações cardiometabólicas do que a CC e CP, demonstrando ser um bom indicador antropométrico,capaz de possibilitar a detecção precoce da obesidade e da distribuição de gordura (AU)

Objective: Evaluate the conicity index of adult patients treated at a Nutrition Outpatient Clinic, to associate it with the presence of pathologies and to compare with anthropometric indicators as to its efficacy as a predictor of cardiometabolic risk. Methodology: Observational study with secondary data from medical records. Socioeconomic, anthropometric data (weight, body mass index, waist circumference, neck and conicity index), number of visits and life habits were obtained and compared between the first and last visit. The analyzes were performed in Stata® 11.1 statistical package, with a significance level of 5%. Results: Sample of 164 adults, 114 (70%) of whom were women. The majority had hypertension (45%), sedentarism (48%), weight above the ideal (90%) and values of CC (82%), CP (82%) and IC (88%) above recommended. The majority presented weight loss (77%), with 29% losing more than 5% of the initial weight, in addition to a significant improvement in eating habits, mainly by women. The taper index was significantly associated with the anthropometric indicators analyzed; was more sensitive in women regarding the risk classification of metabolic and cardiovascular complications, presented significantly higher values in hypertensive and diabetic patients. Conclusion: It is important nutritional monitoring to improve life habits of patients, as well as the use of HF, which was associated with hypertension and diabetes, being more sensitive in women in relation to the risk of cardiometabolic complications than CC and CP, proving to be a good anthropometric indicator, capable of making possible the early detection of obesity and fat distribution (AU)

Parenteral adjuvant potential of recombinant B subunit of Escherichia coli heat-labile enterotoxin

BACKGROUND The B subunit of Escherichia coli heat-labile enterotoxin (LTB) is a potent mucosal immune adjuvant. However, there is little information about LTB's potential as a parenteral adjuvant. OBJECTIVES We aimed at evaluating and better understanding rLTB's potential as a parenteral adjuvant using the fused R1 repeat of Mycoplasma hyopneumoniae P97 adhesin as an antigen to characterise the humoral immune response induced by this construct and comparing it to that generated when aluminium hydroxide is used as adjuvant instead. METHODS BALB/c mice were immunised intraperitoneally with either rLTBR1 or recombinant R1 adsorbed onto aluminium hydroxide. The levels of systemic anti-rR1 antibodies (total Ig, IgG1, IgG2a, and IgA) were assessed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The ratio of IgG1 and IgG2a was used to characterise a Th1, Th2, or mixed Th1/Th2 immune response. FINDINGS Western blot confirmed rR1, either alone or fused to LTB, remained antigenic; anti-cholera toxin ELISA confirmed that LTB retained its activity when expressed in a heterologous system. Mice immunised with the rLTBR1 fusion protein produced approximately twice as much anti-rR1 immunoglobulins as mice vaccinated with rR1 adsorbed onto aluminium hydroxide. Animals vaccinated with either rLTBR1 or rR1 adsorbed onto aluminium hydroxide presented a mixed Th1/Th2 immune response. We speculate this might be a result of rR1 immune modulation rather than adjuvant modulation. Mice immunised with rLTBR1 produced approximately 1.5-fold more serum IgA than animals immunised with rR1 and aluminium hydroxide. MAIN CONCLUSIONS The results suggest that rLTB is a more powerful parenteral adjuvant than aluminium hydroxide when administered intraperitoneally as it induced higher antibody titres. Therefore, we recommend that rLTB be considered an alternative adjuvant, even if different administration routes are employed.

Qualidade higiênico-sanitária de formulações ministradas a neonatos / Hygienic-sanitary quality of infant formulas given to neonates

Premature babies hospitalized at the Neonatal Intensive Care Units,particularly those with low weight and that are not allowed to be normallyfed, often need nutritional support of Infant Formulas (IF). These formulas,when contaminated, can be the source of nosocomial infections, the mostprobable way of contamination being the inadequate handling andstorage of these formulas. Evaluate the Hygienic-Sanitary quality and thesusceptibility profi le of the bacteria isolated from Ifs prepared in the lactary in the city of Rio Grande-RS to antimicrobial agents. IF samples were collected during 6 months by hospital employees working in the morning (Group A) and afternoon (group B) shifts, totalizing 72 analyzed samples. The Most Probable Number method (MPN/ml) was utilized to measure the amount of thermo-resistant and total coliforms. For mesophilic microorganisms the number of Colony-forming Units (CFU/ml) was counted. Also, samples were cultured in Blood and MacConkey Agar media and the isolates were identifi ed by 16S rRNA sequencing and submitted to antibiogram by the Kirby-Bauer method. The samples from groups A and B presented, respectively, 88.9% and 55.5% of contamination by total coliforms and 61.1% e 38.8% by thermo-resistant coliforms. Concerning the count of mesophilic microorganisms, groups A and B presented, respectively, 69.4% and 52.7% of the samples with results above the allowed limit. The identified microorganisms were Escherichia coli, Acinetobacter spp., Pseudomonas spp. and Enterobacter spp. The antimicrobial susceptibility test showed that all isolates presented resistance to at least three tested antimicrobials and that all of the isolates were resistant to tetracycline and one of them was also resistant to a carbapenem (imipinem).

Los recién nacidos prematuros hospitalizados en Unidades de Cuidados Intensivos, principalmente aquellos con bajo peso y poca habilidad para alimentarse naturalmente, necesitan el soporte nutricional de preparadospara lactantes (PL). Los PL, cuando contaminados, son fuente de infecciones hospitalaria, siendo la manipulación y el almacenamiento inadecuados las causas más frecuentes de los brotes de infección. Evaluar la calidad higiénico-sanitaria y el perfi l de susceptibilidad a los antimicrobianos de bacterias aisladas en PL. Las muestras se recogieron durante el período de 6 meses con dos grupos de trabajo: matutino (Grupo A) y vespertino (grupo B) del lactario del hospital, totalizando 72 muestras analizadas. Se realizó el recuento de número más probable (NMP / ml)de termotolerantes y coliformes totales y el recuento de unidades formadoras de colonias (UFC / ml) de los microorganismos mesófi los. Lasmuestras fueron cultivadas en Agar Sangre y MacConkey Agar y los aislados fueron identifi cados por la secuenciación del 16S rRNAy sometidos al antibiograma por el método Kirby-Bauer. Las muestras de los grupos A y B, presentaron, 88,9 y 55,5% y 61,1 y 38,8% decontaminación por coliformes totales y coliformes termotolerantes respectivamente. En cuanto a los mesófi los el recuento de microorganismos de los grupos A y B, presento, respectivamente,69,4 y 52,7% de las muestras con valores arriba del límite permitido. Los microorganismos identificados fueron Escher ichia coli , Acinetobacter spp., Pseudomonas spp. y Enterobacter spp. El antibiograma mostró quelos aislados presentaban resistencia por lo menos a tres de los antimicrobianos, todos fueron resistentes a tetraciclina y uno de ellos también fue resistente a un carbapenem (imipinem).

Prematuros que se encontram em Unidades de Tratamento Intensivo Neonatal, particularmente aqueles com baixo peso e com difi culdades parareceber a alimentação natural, necessitam frequentemente de suporte nutricional por meio de fórmulas infantis (FI). As FI, quando contaminadas, podem ser fontes de infecção hospitalar, sendo a manipulação e oarmazenamento inadequados os prováveis meios de contaminação. O estudo objetivou avaliar a qualidade higiênico-sanitária e o perfilde suscetibilidade aos antimicrobianos das bactérias isoladas em FI preparadas no lactário de um hospital da cidade de Rio Grande-RS.Amostras de FI reconstituídas por lactaristas do turno da manhã (grupo A) e da tarde (grupo B) foram coletadas durante 6 meses, totalizando72 amostras analisadas. Foi realizada a contagem do Número Mais Provável (NMP/ml) de coliformes totais e termotolerantes e a contagem das Unidades Formadoras de Colônias (UFC/ml) de microrganismos mesófi los. Além disso, amostras foram semeadas em Ágar Sangue e MacConkey e os isolados foram identificados por meio de sequenciamento do 16S rRNA e submetidos ao antibiograma através de método de Kirby-Bauer. As amostras dos grupos A e B apresentaram, respectivamente, 88,9 e 55,5% de contaminação por coliformes totais e 61,1 e 38,8% por coliformes termotolerantes. Na contagem de microrganismos mesófilos, os grupos A e B apresentaram, respectivamente, 69,4 e 52,7% das amostras com contagem acima do limite permitido. Os microrganismos identificadosforam Escherichia coli, Acinetobacter spp., Pseudomonas spp. e Enterobacter spp. O teste de suscetibilidade antimicrobiana mostrou quetodos os isolados apresentavam resistência a pelo menos três antimicrobianos testados e que todos foram resistentes à tetraciclina e um também foi resistente a um carbapenem (imipinem).

Detection of salmonella sp in chicken cuts using immunomagnetic separation

The immunomagnetic separation (IMS) is a technique that has been used to increase sensitivity and specificity and to decrease the time required for detection of Salmonella in foods through different methodologies. In this work we report on the development of a method for detection of Salmonella in chicken cuts using in house antibody-sensitized microspheres associated to conventional plating in selective agar (IMS-plating). First, protein A-coated microspheres were sensitized with polyclonal antibodies against lipopolysacharide and flagella from salmonellae and used to standardize a procedure for capturing Salmonella Enteritidis from pure cultures and detection in selective agar. Subsequently, samples of chicken meat experimentally contaminated with S. Enteritidis were analyzed immediately after contamination and after 24h of refrigeration using three enrichment protocols. The detection limit of the IMS-plating procedure after standardization with pure culture was about 2x10 CFU/mL. The protocol using non-selective enrichment for 6-8h, selective enrichment for 16-18h and a post-enrichment for 4h gave the best results of S. Enteritidis detection by IMS-plating in experimentally contaminated meat. IMS-plating using this protocol was compared to the standard culture method for salmonellae detection in naturally contaminated chicken cuts and yielded 100 percent sensitivity and 94 percent specificity. The method developed using in house prepared magnetic microespheres for IMS and plating in selective agar was able to diminish by at least one day the time required for detection of Salmonella in chicken products by the conventional culture method.

A separação imunomagnética (IMS) é uma técnica que tem sido associada a diferentes métodos de detecção de Salmonella em alimentos para aumentar a sensibilidade e a especificidade e diminuir o tempo de análise. Neste trabalho é comunicada a obtenção de microesferas magnéticas sensibilizadas com anticorpos anti-Salmonella e seu uso em associação com a metodologia de cultivo convencional para desenvolver um método de detecção de salmonelas em cortes de frango (IMS-plaqueamento). Inicialmente, microesferas cobertas com proteína A foram sensibilizadas com anticorpos policlonais contra lipopolissacarídeo e flagelo de salmonelas e usadas na padronização de um procedimento que captura Salmonella Enteritidis em cultivo puro e faz posterior detecção em ágar seletivo. A seguir, amostras de carne de frango experimentalmente contaminadas com S. Enteritidis foram analisadas imediatamente após a contaminação e após 24h de refrigeração utilizando três protocolos de enriquecimento. O limite de detecção foi cerca de 2x10 UFC/mL. O protocolo que incluiu enriquecimento não-seletivo por 6-8h, enriquecimento seletivo por 16-18h e pós-enriquecimento por 4h foi o que proporcionou melhor resultado na detecção de S. Enteritidis em carne de frango experimentalmente contaminada. Este protocolo foi comparado à metodologia convencional em estudo de detecção de salmonelas em cortes de frango naturalmente contaminados e obteve 100 por cento de sensibilidade e 94 por cento de especificidade. O método desenvolvido foi capaz de diminuir em pelo menos um dia o tempo de detecção de salmonelas em cortes de frango pela metodologia convencional.

Isolamento de Salmonella de produtos de frango e perfil de suscetibilidade dos isolados a antimicrobianos / Salmonella isolation from poultry products and antimicrobial susceptibility

Salmonella Enteritidis tem sido o principal sorotipo causador de salmonelose. O uso de antimicrobianos na prevenção e no tratamento dessa infecção, assim como a utilização destes como promotores de crescimento, tem provocado o aparecimento de cepas resistentes. O trabalho teve por objetivo investigar a presença de Salmonella em produtos de frango e verificar a resistência dos isolados frente a agentes antimicrobianos. Foram analisadas 120 amostras de produtos de frango, segundo metodologia preconizada pela Food and Drug Administration. Salmonella foi isolada de sete (15,83%) amostras e foram identificados quatro sorotipos, Enteritidis, Newport, Derby e Agona. Enteritidis foi o sorotipo de maior prevalência (71,4%). Trinta e seis (94,7%), 34 (89,5%), 32 (84,2%) e 32 (84,2%) isolados foram sensíveis aos antimicrobianos cloranfenicol, norfloxacina, ciprofloxacina e ampicilina, respectivamente. Trinta e três (86,8%) isolados foram resistentes ao ácido nalidíxico. Todos os isolados (100%) foram sensíveis à cefatriaxona. Vinte e cinco isolados (65,8%) foram resistentes à tetraciclina. Foram encontrados cinco(13,2%) isolados multirresistentes. A fiscalização dos produtos de frango deve ser mais rigorosa, quanto a possível presença de Salmonella. O aparecimento de cepas de Salmonella resistentes a agentes antimicrobianos é indicativo da necessidade de maior controle no uso desses fármacos.

Deteccão e quantificacão de organismos geneticamente modificados em alimentos e ingredientes alimentares / Detection and quantification of genetically modified organisms in food and food ingredients

O cumprimento da legislacão que regulamenta a comercializacão de alimentos e ingredientes contendo Organismos Geneticamente Modificados (OGMs) é totalmente dependente da sensibilidade e confiabilidade dos métodos de deteccão e quantificacão de OGMs. Na presente revisão, foram discutidos os métodos mais relevantes para tais fins, especialmente aqueles que se baseiam na deteccão da proteína ou do DNA recombinante, destacando as suas principais propriedades, limitacões e vantagens. A regulamentacão e algumas sugestões de métodos alternativos para a deteccão de OGMs também são abordadas.

Intoxicaçäo estafilocócica em restaurante institucional / Staphylococcal intoxication in a institutional restaurant

Foi investigado um surto de intoxicaçäo alimentar ocorrido em um restaurante institucional. Cinqüenta e seis pessoas, de um total de 88, foram acometidas de vômitos, diarréia, dores abdominais, prostraçäo, febre e cefaléia após ingerirem uma refeiçäo composta de sanduíche de galinha, refresco de laranja e pudim de leite. Os sintomas apareceram entre uma hora e meia e 12 horas após a ingestäo da refeiçäo e duraram 24 a 36 horas. As taxas de ataque específico foram de 64 por cento para o sanduíche de galinha, de 61 por cento para o refresco de laranja e de 60 por cento para o pudim. A contagem de Staphylococcus aureus secretores de enterotoxina A no sanduíche de galinha foi de 2 X 10(8)UFC.g-1. Estes resultados, juntamente com os obtidos nos questionários aplicados às pessoas que ficaram doentes, forneceram provas circunstanciais que permitiram concluir que ocorreu uma intoxicaçäo alimentar provocada pelo sanduíche de galinha contaminado com enterotoxina A de Staphylococcus aureus.

Aflatoxinas, contaminação fúngica e teor de umidade em produtos utilizados como fonte de fibra alimentar / Afaltoxins, contamination of molds and tenor of humidity used as sources of dietary fiber

A aveia e o farelo de trigo são produtos muito utilizados como fonte de fibra alimentar. Por terem um baixo teor de umidade, estes produtos estão sujeitos à contaminação por mofos e suas toxinas, entre estas as aflatoxinas. Foi investigada a ocorrência de aflatoxinas e determinada a contagem de mofos e o teor de umidade de 25 amostras de aveia e 25 amostras de farelo de trigo. Para quantificação das aflatoxinas foi utilizada a técnica de cromatografia em camada delgada e comparação visual com padrões. A contagem de fungos e a determinação da umidade foram realizadas por métodos padrões. Duas amostras de aveia estavam contaminadas com aflatoxina G1 (2,5 ppb) e cinco amostras de farelo de trigo contaminadas com aflatoxina B2 (duas amostras com 4 ppb e três com 2 ppb). Nos dois produtos a contagem de mofos variou entre 10 e 1000 UFC/g. Os teores de umidade variaram entre 6 e 11 por cento na aveia e 9 e 15 por cento no farelo de trigo. Estes resultados sugerem que estes produtos não apresentam uma importante contaminação por mofos ou aflatoxinas, apresentado-se relativamente seguros para o consumo.